Identificação e validação in silico de potenciais marcadores moleculares para o gênero Leishmania
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Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Piauí
Resumo
As leishmanioses englobam um largo espectro de doenças causadas pelo
parasita do gênero Leishmania. Métodos moleculares estão sendo cada vez
mais empregados para diagnóstico, estudos taxonômicos, filogenéticos e
epidemiológicos envolvendo este parasita. O desenvolvimento de marcadores
moleculares vem se tornando fundamental para diagnósticos mais precisos na
identificação de patógenos de interesse ao homem. O objetivo deste trabalho
foi desenvolver marcadores moleculares in silico para Leishmania e avaliar sua
aplicabilidade o que foi desenvolvido utilizando programas de bioinformática
gratuitos disponíveis na internet. Foram selecionadas 11 sequências do NCBI
para Leishmania infantum e o complexo Leishmania donovani, no qual foi
realizado um alinhamento múltiplo com a obtenção de uma sequência
consenso. Identificada as regiões conservadas, foi definido a região do primer a
ser desenvolvido. Foi desenvolvido três primers, levando em conta o número
de pares de bases, a porcentagem de guanina e citosina, que variou de 37,5 a
47,62 e temperatura de Melting que apresenta um intervalo de 56,48°C a
59,08°C. Os primers desenvolvidos apresentam uma taxa de validação de 85%
a 100%. A PCR-RFLP in silico, mostrou-se adequada para a identificação
de Leishmania a nível de espécie. A variação genética nas sequências em mini
círculos de kDNA entre os isolados L. donovani e L. infantum, pode ser
detectado através dos SNP presentes nos respectivos genomas. A enzima de
restrição RsaI foi considerada ideal para determinar a variação de bandas entre
as duas espécies.
Description
Keywords
Leishmaniose - diagnóstico molecular, Genética - marcadores moleculares, Bioinformática